色譜柱使用常見(jiàn)問(wèn)題

更新時(shí)間：2023-05-17 點(diǎn)擊次數：444

一、柱壓升高

原因：緩沖鹽使用不當導致緩沖鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動(dòng)相傳質(zhì)，引起柱壓升高；

相同化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化

原因：如果沒(méi)有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣，色譜柱內含有的鹽會(huì )使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化；

二、柱效下降

原因：

1、有些緩沖鹽會(huì )滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降;

2、凝結在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對物質(zhì)的保留能力下降，導致柱效下降。因此用過(guò)緩沖鹽后需要對色譜柱進(jìn)行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應特別引起注意。

三、流動(dòng)相中緩沖鹽的正確使用方法

1、使用前的處理: 在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至基線(xiàn)平穩。原則上，用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí))流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來(lái)做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí)，緩沖鹽將會(huì )在色譜柱柱體上析出，沉積下來(lái)，這將可能導致上述對色譜柱的損害。

2、使用后的處理：用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相的區別是，用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min，直至基線(xiàn)平穩。如果該色譜柱在接下來(lái)很長(cháng)的一段時(shí)間內不使用，要長(cháng)期保存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線(xiàn)平穩。

四、使用緩沖液要注意幾點(diǎn)

1、避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用。

2、緩沖液最好要現配現用，往往緩沖液是良好的菌類(lèi)培養液，隔天或放置長(cháng)時(shí)間實(shí)驗時(shí)會(huì )有很多怪現象發(fā)生。

3、實(shí)驗后不可用有機溶劑直接過(guò)度，有機溶劑會(huì )處使鹽類(lèi)析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用95：5的水甲醇沖洗。

4、使用緩沖液要及時(shí)掌握ph范圍，做到胸中有數。

5、清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。

6、長(cháng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀(guān)察接頭處有無(wú)析出，若有白色鹽類(lèi)析出，可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。

7、選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類(lèi)造成不必要的麻煩。

如果流動(dòng)相中有機溶劑的比例很高是不能用來(lái)沖洗緩沖鹽的，是洗不出來(lái)的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇沖洗，是可以把緩沖鹽沖洗出來(lái)的，然后用純的有機溶劑來(lái)保護柱子。解決方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鐘以?xún)茸詈?，且?.8的流速較好. 如果用純水沖，容易造成鍵合的碳鏈的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液沖?？梢杂眉兯媪鲃?dòng)相中的緩沖液，有機相不變。這樣沖洗柱子比較穩妥。